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XL10-Gold化学感受态细胞图片
产品货号:
SY0018
中文名称:
XL10-Gold化学感受态细胞
英文名称:
XL10-Gold Chemically Competent Cell
产品规格:
100μl×10管
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
XL10-Gold化学感受态细胞是经特殊工艺处理得到的感受态细胞,特别适合于大分子量DNA的高效转化。具有四环素和氯霉素抗性,使用Puc19质粒测得其转化效率达108cfu/μg,

本品基因型:TetrΔ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F´proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]。

主要具有如下特点:
① Hte表型可增强较大分子量质粒和连接产物的高效转化;
② 具有限制性内切酶缺陷性,更利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取;
③ 更适于质粒文库的构建;
④ 具有lacIqZΔM15,可用于蓝、白斑筛选。

注意事项

1)感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2)整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3)为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温,且每次转化感受态使用量,不低于100μl。
4)为防止转化不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,最低化实验可能遇到的风险。

使用方法

1)取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2)向100μl感受态细胞悬液中加入0.1-50ng(<10μl /100μl感受态)目的DNA或2μl连接产物,轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30min。
3)置于42℃水浴中热激30s,然后快速将管转移到冰浴中,冷却2-3min,该过程不要摇动离心管,否则会降低转化效率。
4)向离心管中加入900μl 42℃预热的无菌NZY+培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床振荡培养1h(225-250rpm),目的是促使菌体复苏。
【注】:此步也可用LB培养基(不含抗生素)进行菌体复苏。
5)取上述≤200μl转化产物涂至含有相应抗生素的LB固体平板上,将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
【注】:如需做蓝白斑筛选,需至少孵育17h,以充分显色。

储存条件:-80℃
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